经验贴/如何养好THP-1细胞❓

发布日期：2024-12-18 12:21    点击次数：87

1️⃣THP-1细胞是从人单核细胞白血病细胞系，悬浮生长，可诱导为巨噬细胞 2️⃣培养基配制 1640➕10%血清or血清替代➕0.05mM β-巯基乙醇，双抗可加可不加 ⚠️THP-1对血清的要求比较高，刚开始用国产的血清一直养不起来，正好之前购买了一批【XR】的血清替代，就配了一管培养基试试，重新复苏一管后长得嘎嘎好，圆滚滚的，相对于进口血清，XR血清替代性价比很高～ ❗关于加不加β-巯基乙醇，我的经验来看是要加，没加细胞状态不好，THP-1细胞对氧化敏感，β-巯基乙醇能够通过其还原性来保护细胞免受氧化应激的损伤，维持细胞内环境的稳定。 3️⃣培养经验（换液、传代及冻存） ❗建议使用非TC处理的培养瓶 1、换液 补液法：初始5ml培养基培养，隔天加2ml培养基，一周进行离心换液，不可频繁离心以免机械损伤；THP-1生长具有密度依赖性，细胞密度低时可将T25培养瓶立起来以提高局部密度 半换液：将培养瓶立起来放培养箱30min，小心吸出一半（2-3mL)的培养基，在原瓶中添加2-3mL新鲜培养基即可 2.传代 直接分瓶：摇晃培养瓶使细胞均匀分布，1传2或3分瓶，然后添加培养基即可 离心法：1000rpm离心5min收集细胞，离心后1传2或3，本人更推荐直接分瓶法 3.冻存：配好的THP-1培养基：DMSO=9：1配制冻存液，离心后用冻存液重悬，将冻存管置于梯度冻存盒后放入-80℃冰箱，我一般补液法后离心的细胞冻存3管，复苏起来状态很好 ⚠️血泪教训：商品化的无血清冻存液很方便但不太适用于THP-1，之前有一批偷懒用了无血清冻存液后复苏起来全嘎了 ‼️比较重要的三点∶培养瓶一定要使用非TC处理的，不然很容易贴壁极化；一定要添加β-巯基乙醇；血清要用好的，如果经费不足可以试试XR血清替代，性价比高且批次稳定～